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动物体内RNA转染试剂,Entranster-in vivo,核酸和转染试剂混合后注射,轻松进行RNA干扰,基因敲除、沉默实验,3天可得出结果。下面以50μg的核酸与25μl转染试剂,总注射体积200μl,20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释,直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。

1. 核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl,加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl,使葡萄糖终浓度为5%,终体积为100μl,充分混匀。

2. 转染试剂的稀释。取25μl的Entranster-in vivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释,并用纯水25μl补足,得到葡萄糖终浓度为5%,终体积为100μl液体,充分混匀。

3. 转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中,立即充分振荡混匀。

4. 室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用,不宜长期存放。

5. 动物注射。

说明:1).尾静脉注射时请掌握注射技巧,一般选用远端1/3处静脉注射,如感觉到阻力和轻微隆起,请停止注射,重新寻找静脉进行操作,不要强力推注,否则容易将药液注射在尾部,导致尾部溃烂。注射完成后移去针头,按压针孔10秒以上,防止药液流出。2). 2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量,如果动物可以耐受,可以按比例增加剂量,这样效果更好。3).局部注射,尽可能多注射药液,有利于提高转染效果。

6. 基因表达检测。一般来说,根据注射方法和靶器官的差异,12-48小时后基因表达效果较好。

7. 长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果,可以采用多次注射的方法,注射频度一般为每间隔2-3天一次,也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。                                     

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共 0 个关于【如何进行动物体内RNA干扰实验?】的回复 最后回复于 2017-6-20 14:17

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