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蛋白电泳之考马斯亮蓝染色法和铜染法

蛋白电泳结束,对凝胶中的蛋白显色非常重要,可以知道蛋白迁移的是否均匀。如果分离后的蛋白需要转膜,就用铜染,因为考马斯亮蓝染色是不可逆的。


考马斯亮蓝染色

转膜后用考马斯亮蓝染色凝胶检测转移的有效性,或者不需要转膜仅仅观察蛋白SDS-PAGE分离的结果时用考马斯亮蓝染色。


  • 电源关闭,凝胶中的蛋白就会扩散,因为蛋白在溶液中是可溶的。
  • 为了防止扩散,用固定液(40%双蒸水、10%醋酸、50%甲醇)处理凝胶,能使几乎所有的蛋白沉淀(成为不溶性的)。
  • 在上述溶液中加入0.25%考马斯亮蓝R-250使被固定的蛋白染色,保持摇动、室温、4小时至过夜。
  • 加入脱色液(67.5%双蒸水、7.5%醋酸、25%甲醇)润洗,保持摇动,更换脱色液直到洗去多余染料。染料不会结合到丙烯酰胺上,凝胶背景清晰,蛋白条带呈现深蓝色。

铜染法
  • 电泳凝胶用蒸馏水清洗(最多30秒)。
  • 转移到0.3M CuCl2溶液中染色5-15分钟。
  • 去离子水清洗1遍。
  • 在暗背景下观察在蓝色胶背景下蛋白出现透明条带。
  • 将凝胶置于0.1-0.25M Tris/0.25 M EDTA pH8.0 缓冲液中漂洗至凝胶完全脱色。
  • 可以继续进行转膜。
(乐研生物 www.loybio.com)




标签Western_Blot
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