一键导航
您当前所在位置:乐研生物 生物圈 技术交流 Protocol集锦
大分子量蛋白和小分子量蛋白转膜的注意事项

大分子量蛋白 (>100kDa) 在凝胶电泳分离迁移较慢,一般应采用低浓度的凝胶,但低浓度凝胶易碎,所以操作时需十分小心。


大分子量蛋白的转膜需要注意一下几点:

  • 大分子量蛋白的转膜是非常慢的。
  • 大分子量蛋白易在凝胶里形成沉淀影响转膜,转膜时在电转液中加入 0.1% SDS,可避免出现这种情况。
  • 而甲醇易使SDS从蛋白上脱离,因此适当降低甲醇浓度至10%或更低,防止蛋白沉淀。
  • 降低电转液中甲醇的含量,这样可以促进凝胶的膨胀,更易于大分子量蛋白的转出。
  • 使用硝酸纤维素膜时,甲醇是必需的。如果是PVDF膜,甲醇可以不必加入电转液,但需要预先用甲醇活化。
  • 选择湿转,4度转膜过夜。

对于大于500kDa的蛋白,请参考以下文献:
High-efficiency blotting of proteins of diverse sizes following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Anal Biochem 247,185-192(1997)

小分子量蛋白的转膜需要注意一下几点:


  • 高浓度的凝胶有利于小分子量蛋白的分离。一般在目的蛋白离凝胶前沿0.5-1cm时停止电泳,太靠近凝胶前沿易引起边缘效应。
  • SDS阻止蛋白与膜的结合,小蛋白更是如此。因此电转液中可以不加SDS。
  • 保持甲醇浓度20%。
(乐研生物 www.loybio.com)

标签Western_Blot
分享到:

乐研生物版权申明
©本文源自乐研生物,转载请注明©
如该文侵犯了您的版权,请联系管理员

本帖被以下淘专辑推荐:

共 0 个关于【Western Blot大分子量和小分子量蛋白转膜的注意事项】的回复 最后回复于 2012-12-22 22:44

您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入乐研 qq_login

本版积分规则

发新帖

版块推荐乐研BOX

关注乐研生物微信 关注乐研生物微博 扫描关注乐研生物微信/微博
Copyright (C) 2012-2019 www.loybio.com, All rights reserved
Powered by Discuz!   渝ICP备12003567号-4
请勿发布违反中华人民共和国法律法规的言论,会员观点不代表乐研生物官方立场。
beian

渝公网安备 50010602500619号

返回顶部
手机端微信扫描,关注乐研生物微信

关注乐研生物微信
体验移动化生物科研

关注乐研官方微信 快速回复 返回列表