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本帖最后由 统统 于 2012-12-16 13:57 编辑

western blot高背景的常见问题解决:

Western blot广泛应用于特定组织/细胞中目标蛋白是否出现及其量变、位移等分析,是实验室里最常用的蛋白分析平台。但由于其中技术环节较多,获得稳定一直、高质量的结果也并非易事。WB出现高背景是最为常见的遭遇之一,有时一张结果的很好的图,可能因此牺牲掉。下表列举了造成WB高背景的可能原因和解决方案:


现象
可能的原因
改善建议
高背景
漂洗不充分
增加漂洗液体积和漂洗次数。

(酶标)二抗浓度过高
增加抗体稀释度

发生蛋白-蛋白相互作用
在漂洗液和反应液中加入Tween-20(0.05%)以尽量减少发生蛋白作用并提高信噪比

试剂质量差
尽量采用高质量的试剂并用双蒸水配制

封闭剂与抗体发生交叉反应
尝试换一种封闭剂或在漂洗液中添加Tween-20

过度曝光
缩短曝光时间

孵育抗体中膜干了
在孵育过程中确保使用的试剂足量

抗体质量差
选用经亲和纯化过的高质量抗体



标签Western_Blot
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共 4 个关于【Western Blot高背景的原因及解决方案】的回复 最后回复于 2014-3-17 20:32

飘雪 发表于 2014-2-25 23:06:24 | 显示全部楼层
虚心向楼主学习
吹吹水 发表于 2014-3-5 20:49:29 | 显示全部楼层
虚心向楼主学习
快乐的老鼠 发表于 2014-3-16 14:58:52 | 显示全部楼层
感觉不错
一线流星 发表于 2014-3-17 20:32:42 | 显示全部楼层
学习了
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