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本帖最后由 统统 于 2012-12-16 13:55 编辑

常见问题解决:western blot信号弱

Western blot广泛应用于特定组织/细胞中目标蛋白是否出现及其量变、位移等分析,是实验室里最常用的蛋白分析平台。但由于其中技术环节较多,获得稳定一直、高质量的结果也并非易事。相信同学们都遇到过WB得到的条带若隐若现、犹抱琵琶半遮面的情形,不过这总算也是半个惊喜。下面给出可能的原因及改善建议,让你的条带显露真身:


现象
可能的原因
改善建议
信号弱
封闭不合适
封闭剂可能与目的蛋白有亲和性而干扰了检测。换用别的封闭剂/或减少封闭剂的用量及孵育时间

抗体反应时间不够
增加孵育时间

抗体浓度太低或抗体失效
多次冻融及细菌污染的抗体溶液其低度和活性都会受到影响。可增加抗体浓度或重新新鲜制备抗体溶液

检测试剂过期失效
使用新鲜或存储得当的底物,过期底物灵敏度会降低

蛋白转移问题
优化蛋白转移操作

生色反应检测时用的是干膜
如果在生色检测系统中得到的信号太弱,可能是膜干透了的原因。尝试将膜在水中再浸湿以加强对比

叠氮化物抑制了HRP
印迹试剂中避免出现叠氮化物

抗体量过低
加大电泳的抗原上样量

(乐研生物 www.loybio.com)



标签Western_Blot
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本帖被以下淘专辑推荐:

共 13 个关于【Western Blot信号弱的原因和解决方案】的回复 最后回复于 2016-6-23 09:37

牛奶多 发表于 2014-2-27 11:48:10 | 显示全部楼层
必须支持。。。
风蓝月 发表于 2014-3-2 17:41:37 | 显示全部楼层
这个不错,谢谢共享
波斯湾 发表于 2014-3-4 14:21:03 | 显示全部楼层
学习了
似曾相识 发表于 2014-3-5 07:52:22 | 显示全部楼层
找了老半天终于在这里看到了!非常感谢!
原点 发表于 2014-3-6 19:47:31 | 显示全部楼层
前来围观
根本英雄 发表于 2014-3-13 14:26:56 | 显示全部楼层
很不错的哦,支持,加油
耕地的牛 发表于 2014-3-14 17:37:22 | 显示全部楼层
真心有用,特地注册表示感谢
找不到北 发表于 2014-3-17 00:32:27 | 显示全部楼层
向楼主的分享精神致敬
加糖的咖啡 发表于 2014-3-19 16:49:43 | 显示全部楼层
谢谢楼主,收藏
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