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蛋白酶和磷酸酶抑制剂

一旦细胞裂解发生,水解、去磷酸化和变性就开始了!如果样本一直保存在冰上或4度,并且一开始就在抽提液中加入适当抑制剂的话,这些反应将可以大大减缓。


各种蛋白酶和磷酸化酶抑制剂如下,你也可以自己研制最优化的抑制剂的配比。


抑制剂
蛋白酶或磷酸酶
终浓度
储存液(保存于-20度)
抑酶肽
胰岛素、胰凝乳蛋白酶、血纤维蛋白溶酶
2ug/ml
水稀释到10mg/ml,一旦融化不能再使用
亮肽酶素
溶酶体
5-10ug/ml
水稀释,一旦融化不能再使用
抑肽素A
天冬氨酸蛋白酶
1ug/ml
甲醇稀释,1mM
PMSF
丝氨酸半胱氨酸蛋白酶
1mM
乙醇稀释,可重复使用
EDTA
需要Mg2+和Mn2+的金属蛋白酶
5mM
水稀释至0.5M,调节pH8.0
EGTA
需要Ca2+的金属蛋白酶
1mM
水稀释至0.5M,调节pH8.0
氟化钠
丝氨酸/苏氨酸磷酸酶
5-10mM
水稀释,一旦融化不能再使用
原钒酸钠
酪氨酸磷酸酶
1mM
水稀释,一旦融化不能再使用

相关链接:原钒酸钠的制备
(乐研生物 Lovely researcher.com)

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