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Western blot膜封闭注意事项

原理:
  • 为防止一抗或二抗与膜的非特异性结合,需要进行膜的封闭。

膜的封闭有两种传统方法:

       脱脂奶粉和BSA(Cohn 因子V)
  • 脱脂奶粉成本低,适用于大多数应用。但注意不可用于检测磷酸化蛋白时的封闭,因脱脂奶粉含有酪蛋白,该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白,会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。
  • BSA相对来说成本较高,但某些抗体用BSA封闭时可能会产生比脱脂奶粉更强的信号。在进行磷酸化蛋白检测时,可以考虑使用BSA封闭。

总体来说,封闭方法也是Western Blot优化的一个方面。在Western Blot没有得到理想效果时,可以考虑换另一种封闭方法。


条件:

常规封闭条件为封闭缓冲液封闭1小时,4度震摇,封闭后用TBST溶液洗5秒。封闭的时间也是Western Blot优化需要注意到方面,优化时可以考虑延长或缩短封闭的时间。

(乐研生物 www.loybio.com)

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共 24 个关于【Western blot膜封闭的注意事项-尤其是磷酸化蛋白】的回复 最后回复于 2016-10-24 10:26

相信自己 发表于 2014-1-12 11:42:31 | 显示全部楼层
谢谢楼主,收藏
蓝色枫叶 发表于 2014-1-14 13:59:47 | 显示全部楼层
总结的很好,学习了
东北风 发表于 2014-1-17 07:13:17 | 显示全部楼层
顶一个了
天热扇扇子 发表于 2014-1-17 17:11:19 | 显示全部楼层
学习了
傲野 发表于 2014-1-18 08:20:23 | 显示全部楼层
赞一个!
传说中的猪 发表于 2014-1-18 16:23:16 | 显示全部楼层
不错不错 支持下,又学习到新知识了
信天游 发表于 2014-1-31 01:35:10 | 显示全部楼层
很不错的哦,支持,加油
阿牛 发表于 2014-2-6 17:25:53 | 显示全部楼层
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