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一、原理

一次性敲除2万个基因:OneShine™CRISPR/Cas9基因敲除细胞文库

一次性敲除2万个基因:OneShine™CRISPR/Cas9基因敲除细胞文库


Lenti-CRISPR V2质粒图谱

        Lenti-CRISPR V2质粒图谱如上所示。gRNA与Cas9蛋白结合于同一个载体上。我们设计合成了12万个gRNA(靶向约2万个基因),分别连接到Lenti-CRISPR V2载体上,然后把12万个质粒混合起来,形成CRISPR/Cas9 基因敲除质粒文库。并且我们将此文库整合到了细胞中,一个125cm2细胞培养瓶中含有约10^8个细胞,每个细胞被敲除了一个基因,共约2万个基因被敲除,所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有5000个(10^8/2万)。拿到细胞后,可进行传代。

二、参数

  靶基因物种:人

  靶基因数目:19,050

  gRNA数目: 123,411

  细胞类型:胃癌、乳腺癌、结肠癌等癌细胞系和永生化的细胞系。

  价格:7万元/株

三、应用

【应用举例:细胞凋亡相关基因筛选】

   取细胞文库进行扩增,然后平均分成两份,每一份包含108个细胞,每个细胞被敲除了一个基因,共约2万个基因被敲除,所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有5000个(108/2万)。向其中一份细胞中加入放线菌素D、诱导细胞凋亡(A组),在另一份细胞中加入溶剂、作为对照(B组)。A组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞A1、未凋亡细胞A2,B组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞B1、未凋亡细胞B2。分别对A1、A2、B1、B2进行短测序,检测哪些基因被敲除了。A2中被敲除的基因具有抗凋亡作用,B1中被敲除的基因具有促进凋亡的作用。其它应用:

(1)新药靶点确定与验证

(2)环状RNA上游调控机制分析

(3)Long noncoding RNA作用机制验证

(4)脂肪代谢机制研究

(5)干细胞自我更新、不对称性分裂机制等。
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共 3 个关于【一次性敲除2万个基因:OneShine™CRISPR/Cas9基因敲除细胞文库】的回复 最后回复于 2017-9-15 14:45

wangsheng0726 发表于 2017-9-15 14:43:39 | 显示全部楼层
批量敲除基因,得到阳性结果,效率高,周期短tonguetonguetongue
wangsheng0726 发表于 2017-9-15 14:42:54 | 显示全部楼层
一次性敲除2万个基因,神一样的存在lol
wangsheng0726 发表于 2017-9-15 14:45:49 | 显示全部楼层
CRISPR/CAS9,基因的神剪,为科研服务。OneShine CRISPR/CAS9细胞文库大批量的敲除基因!
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