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流式细胞分选/检测-多色组合原理和方法

  • 了解流式细胞仪的配置:根据配置的激光管选择能够检测的染料。
  • 染料亮度和抗原表达匹配:表达弱的目的蛋白选用强荧光,而表达强的蛋白选用弱荧光。
  • 目的蛋白染色的重叠化:同一个细胞抗原可采用多激光激发减少重叠化,例如,同一个细胞同时染APC-CD133和FITC-CD133,比单独用APC-CD133或FITC-CD133更能区分CD133的阳性和阴性细胞。
  • 避免偶联染料的使用带来假阳性:PE(藻红蛋白)和APC(别藻蓝蛋白)为荧光蛋白,性质稳定。而PE-cy5,PE-cy7等为PE的衍生物,由于Tandem-dye降解会产生假阳性(一般染色后应立即检测,2小时出现降解,22.5小时阳性峰即漂移)。因此,可以选择APC-H7,比APC-cy7更稳定。
  • 用红激光做自发荧光高的样本。
  • 不同克隆的抗体,结果可能会不同,尽量选择阳性和阴性区分明显的抗体。

对于多色抗体的组合,也可以选用BD网站上的应用工具,利用“荧光光谱查看器”选择泄漏最少的多色组合,操作如下:


流式细胞分选/检测-多色组合方法

流式细胞分选/检测-多色组合方法


流式细胞分选/检测-多色组合工具

流式细胞分选/检测-多色组合工具


流式细胞分选/检测-多色组合工具光谱分析

流式细胞分选/检测-多色组合工具光谱分析


流式细胞分选/检测-多色组合工具光谱交叉分析

流式细胞分选/检测-多色组合工具光谱交叉分析



同样,利用“多色设计平台”你也可以输入你所感兴趣的蛋白,软件会为你推荐一个合适的多色组合,操作如下:

流式细胞分选/检测-多色组合选择软件

流式细胞分选/检测-多色组合选择软件


流式细胞分选/检测-多色组合选择软件2

流式细胞分选/检测-多色组合选择软件2


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