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质粒或连接产物的转化步骤/方法

  • 于100μl感受态细菌悬液中,加入少于5μl的目的质粒(具体加入的质粒量依据个人实验决定,保持质粒与感受态的比例不大于5%有利于发挥感受态的最大效率,且一般我们连接体系多为10μl,剩余的5ul还可保存起来,用于操作失误后第二次转化),轻轻混匀,冰上放置30 min;
  • 42℃水浴热激90s或37℃水浴5min,迅速取出置冰浴2min;
  • 加入1ml37℃预热的LB液体培养基,混匀后37℃摇床培养1h,使细菌恢复正常生长状态;
  • 5000 rpm离心5min,弃1ml上清,沉淀重悬后取剩余的100μl菌液均匀涂布于含抗生素的LB平板上,37℃正面向上放置30min,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养8-16 h。

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