一键导航
您当前所在位置:乐研生物 生物圈 技术交流 分子生物学

相信每个做分子实验的同志都会涉及到凝胶电泳,那么核酸染料就首当其冲!究竟该如何选择,真是苦煞我们这些战斗在第一线的同志。就此甚至有国人还发表一篇论文比较了EB和SYBR GREEN的染色效果的论文[1],重要性可见一斑。以前实验室没有条件,于是统一使用EB,为此专门开辟了一块房间跑胶。但大家心里都惴惴,倒是老板们为了安抚,经常举例说“某某某经常直接空手抓胶,没那么可怕...云云”。但究竟身体是自己的,必须对自己负责,因此电泳室也成了几个为数不多的大家可以认真执行佩戴手套的地方之一。那家伙,哪天万一带的PE手套漏了,势必还得去水龙头下冲洗个十来分钟,然后郁闷一两个小时。

换实验室后,老板要求取消EB,换个核酸染料。大家群起拥护!为了保险,我们选择了大公司(invitrogen)的产品,当时,也是没有经验,也不知买那个好,于是乎就SYBR GREEN和SYBR GOLD各买了一包,那丫的SYBR GREEN直接没法用,仪器看不到,更别提切胶(也怪当时买仪器的时候没考虑周全)。还好SYBR GOLD还能依稀看见一点,就这样一用就是一年。但自从使用SYBR GOLD以后怪事就没断过,对迁移率影响太大了,自此DNA marker的参照作用微乎其微,条带正确与否一半凭感觉了(注:当然可能与我们没有在制胶的过程中加入SYBR GOLD,而是为了节约,把SYBR GOLD加在样品里)。

最近终于受不了了,开始寻找新的替代品。EB肯定是要不得的,现在没有专门的房间,真没法玩EB。GoldView在国内很火,但也有报道称其是吖啶橙类似物,而后者是强致癌物(插一句,在实验室建成前,有一阵子过渡时间在公共平台做过实验,当时我们还用的EB,就见一哥为了显示他使用的GoldView多么高级、无害,真正表演了空手抓胶,当真惹不起!)。当然GoldView在国内现在还是宣称是EB的绝好替代物,无毒、无害的。但既然有人揭发,而GoldView方又没有人出来反证,甚至有的GoldView代理厂商竟然站出来说GoldView虽然有毒,但只会引起移码突变其结果就是引起细胞死亡而不会癌变,比其他的强,云云。这个就真的不敢苟同了,各位各自理解吧。既然没有人站出来反证(没爹的孩子就是惨,到现在也不知道GoldView是哪家公司的产品,百度、google都查不到,知道的同志不妨告知),为了保险起见,那我就姑且只能认为GoldView安全性上也有折扣。google了一下,目前世界公认的最安全的核酸染料是SYBR Safe[2],同样是Invitrogen的孩子,高富帅!但查了一下,发射和检测波长和SYBR GREEN是差不多的,甚至说灵敏度上还要差上一截,顿时凉了半截(没配套仪器,攀不上!)。那么另外找到一个biotium产的GelRed[3],看了介绍似乎接近完美,不需要专门的成像设备,据称还通过第三方公司认证,毒性比EB和SYBR GREEN低(没比较GoldView,可能是GoldView在国外没那么出名)。当然也受到很多公司的推荐,下图贴出来其中给出的一个比较表格,供大家参考。

常见核酸染料的比较

常见核酸染料的比较


用GelRed和Toxic又是上下搜索了一番,倒是也没查到什么反对的声音。好吧,目前也只能相信GelRed可能是安全的。于是打通biotium中国总代理的电话,询问购买事宜,接电话的一听就是一个新毕业的生物同行,一会蹦一个我的某某同学在哪里哪里实验没有发现你说的顾虑;另一个哪里哪里的同学觉得用的挺好等等(学生物的悲哀,进试剂公司算是毕业的一个很大去向!)。没试过效果,先订一包试试看,此刻应该在路上了!



先就网上和电话中得到的关于GelRed资料的整理一下,也为各位节约一点时间:
  • GelRed的激发和发生谱线和EB基本一致,所以适用于常规的凝胶成像仪;
  • GelRed是一个大分子量的产品,这也是它无法穿透细胞膜(更安全)的原因之一,另外,可能导致其扩散能力较差,电话里告知,如果泡胶后染需要长达30min(想必你和我都会选择放弃后染!);
  • GelRed会影响DNA的迁移率,国外的同志也因此在相互讨教,电话里面也得到确认,尤其是在GelRed直接加在样品里可能更甚;
  • GelRed在电场作用下不会发生明显迁移,而EB或SYBR系列染料在电泳过程中会反方向迁移(所以显示小片段效果不是很好?);
  • GelRed稳定性非常好,可以直接微波加热(当然按理说挥发性会低点,不容易污染其他地方;不好的地方是万一又是个剧毒的主,难降解就成缺点了);
  • GelRed的灵敏性要比EB高,所以在使用的使用样品要少加一点(或者把GelRed进一步稀释一点,好处是成本又降下来一点),否则可能出现拖尾现象, 导致条带不是很锐利;
  • GelGreen相比GelRed安全性更高,如果有可检测绿色荧光的凝胶成像仪的同学不妨试一试;

目前就这么发现这么多!也期望不要再爆出GelRed什么剧毒之类,那就悲剧了!希望早日找到可以完美替代EB的真正安全的产品,给我们这些小弟们一点点安全感(但毕竟核酸染料是和DNA直接起作用的,想要完全的安全几乎不可能,这里不得不提一下像GelRed这种不进入细胞的染料,到还真是一个可取的方向)。也希望商家们能正视安全性的问题,不要再忽悠我们,你可以卖假货,你可以掺水,但请不要拿我们的健康当儿戏,请不要再来残害我们。


当然上面种种,只是个人基于现在网络可以查询的数据,进而自己的选择历程,不希望误导大家,大家还是要自己把握好曲直。更加期待的是大家可以将你们的经历和经验贴出来,如果你有更好的选择,请一定一定不要忘记我们这些尚在黑暗中的同学,做一点实验,想保护自己真的这么难吗?(乐研生物 www.loybio.com)

GelRed和GelGreen不能进入活细胞

GelRed和GelGreen不能进入活细胞


官网给的样图,GelRed和GelGreen灵敏度优于其他染料

官网给的样图,GelRed和GelGreen灵敏度优于其他染料


网上疯传的关于GoldView是吖啶橙类似物的证据

网上疯传的关于GoldView是吖啶橙类似物的证据


相关链接:


分享到:

乐研生物版权申明
©本文源自乐研生物,转载请注明©
如该文侵犯了您的版权,请联系管理员

本帖被以下淘专辑推荐:

  • · 核酸|主题: 48, 订阅: 1

共 6 个关于【安全、高灵敏核酸染料的选择(EB,SYBR系列抑或Gel Red)】的回复 最后回复于 2017-1-6 22:29

拾阶 发表于 2012-8-6 21:45:58 | 显示全部楼层

到货一周了,效果还比较理想!尤其是小条带,但稍大的条带不够清晰(DL2000中2000和1000的带就不够清晰)。

标称的稀释倍数(10000*)可以进一步超标准稀释(25000*)几乎不影响效果。lol

统统 发表于 2012-8-7 14:46:06 | 显示全部楼层
好帖!必须顶起!我们实验室是sybr goldsweat
WWW-B 发表于 2012-8-7 14:46:56 | 显示全部楼层
谢谢楼主!!!
金博益生物_刘 发表于 2012-12-24 20:23:09 | 显示全部楼层

首先要顶楼主,在此向大家推荐一款我们的Genecolour核酸染料,属于聚次甲基类,和GelGreen 一样,可在紫外和可见光下观察。刚才楼主提到染大片段效果不理想,是因为染料本身灵敏度比EB高,请减半用量大效果就会大大提长,还有就是注意电压不要超过120V为宜,染料不怕热,从微波炉里拿出来直接加染料,不要等到凉了后在加,这样会条带会弥散。

我们大量提供试用装,有需要请联系我们,金博益 刘彩虹 15001088378 在此负责保证不是丫啶噔,安全。

microtek-ims 发表于 2017-1-6 22:29:02 | 显示全部楼层
我们有配套SYBR Safe蓝光荧光扫描仪bio-1000f,灵敏度高达0.008ng/ul, 可以搭配gel red,gel green等,若有兴趣,请联系 18918109606  叶咏
microtek-ims 发表于 2017-1-6 22:29:45 | 显示全部楼层
我们有配套SYBR Safe蓝光荧光扫描仪bio-1000f,灵敏度高达0.008ng/ul, 可以搭配gel red,gel green等,若有兴趣,请联系 18918109606  叶咏
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入乐研 qq_login

本版积分规则

发新帖

版块推荐乐研BOX

精彩推荐

更多>
关注乐研生物微信 关注乐研生物微博 扫描关注乐研生物微信/微博
Copyright (C) 2012-2017 www.loybio.com, All rights reserved
Powered by Discuz!   渝ICP备12003567号-4
请勿发布违反中华人民共和国法律法规的言论,会员观点不代表乐研生物官方立场。
beian

渝公网安备 50010602500619号

返回顶部
手机端微信扫描,关注乐研生物微信

关注乐研生物微信
体验移动化生物科研

关注乐研官方微信 快速回复 返回列表