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琼脂糖凝胶电泳-凝胶的配置

配置方法:

  • 配置适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常为0.5×TBE或1×TAE);
  • 根据制胶量及凝胶浓度,准确称取琼脂糖粉(见表格),置于适当的锥形瓶中;
  • 加入一定量的步骤1中配置的电泳缓冲液(这里的缓冲液与电泳时使用的缓冲液必须一致,总液体量不宜超过锥形瓶的一半);
  • 在锥形瓶瓶口封上保鲜膜(或一次性手套),并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热直至溶解完全(溶解不完全,会导致制胶不均匀,电泳条带模糊,也不可加热时间过长,否则可能爆沸,蒸发损失过大,浓度不准确。
  • 带溶解完全后室温冷却(或边摇动边使用冷水冲淋锥形瓶外壁加速降温,或者干脆在前面一步操作时只加入1半体积的缓冲液,溶解后补加另一半缓冲液,可以迅速降温,但注意要充分混匀)至60度左右(不烫手),此时可以加入核酸染料如EB(终浓度为0.5μg/ml,为强致癌剂,注意做好防护)或Gel Red(1/10000,安全性稍高,但必要的防护还是需要的)等,并充分混匀。
  • 将琼脂糖倒入制胶板中,插入合适孔径的制胶梳;
  • 在室温下凝固约30分钟左右(如果制好的凝胶不立即用于琼脂糖凝胶电泳,请用保鲜膜将凝胶包好放4度保存)

(乐研生物 www.loybio.com

相关链接:琼脂糖凝胶浓度与线性DNA的最佳分辨范围

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共 0 个关于【琼脂糖(agrose)凝胶的配置-核酸电泳】的回复 最后回复于 2012-10-22 23:30

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